“土壤原位酶谱测试”(In situ Enzyme Histochemistry 或 Soil Zymography)是一种创新的、非破坏性的技术，用于可视化并定量土壤中特定酶活性的空间分布。它突破了传统实验室方法(如浸提-比色法)只能提供“整块土壤平均值”的局限，能够揭示酶活性在根际、团聚体、孔隙、微生物热点区等微尺度上的异质性。

　　技术类型

　　1. 薄层原位酶谱法(Thin-layer Zymography)

　　材料：聚丙烯酰胺凝胶(PAGE gel)或琼脂糖凝胶片。

　　操作：

　　将凝胶片(含底物+显色剂)置于新鲜土壤剖面或根际区域。

　　保持一定湿度和温度(如25°C)孵育数小时至数天。

　　取出凝胶，清洗，扫描成像。

　　适用酶：

　　β-葡萄糖苷酶(底物：MUF-β-D-葡萄糖苷 → 荧光)

　　磷酸酶(底物：MUF-磷酸盐 → 荧光)

　　蛋白酶(底物：明胶+考马斯亮蓝，水解后脱色区即活性区)

　　纤维素酶、几丁质酶等。

　　2. 滤纸原位酶谱法

　　材料：滤纸浸渍底物-显色混合液。

　　优点：成本低，柔韧性好，适合不平整土壤表面。

　　缺点：分辨率和稳定性低于凝胶。

　　3. 荧光酶谱法(Fluorogenic Zymography)

　　底物：使用荧光底物，如：

　　MUF(4-Methylumbelliferyl)或 AMC(7-Amino-4-methylcoumarin)衍生物。

　　检测：用紫外灯或荧光成像仪激发，检测荧光信号。

　　优点：灵敏度高，背景干扰小，可动态监测。

　　缺点：需荧光设备，底物成本高。

　　4. 显色酶谱法(Colorimetric Zymography)

　　底物：生成有色沉淀，如：

　　磷酸酶：BCIP/NBT(生成蓝紫色沉淀)

　　多酚氧化酶：焦性没食子酸(生成棕红色嘌呤红)

　　优点：无需特殊设备，肉眼可观察。

　　缺点：灵敏度较低，易扩散。

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