土壤固氮酶活性的测定主要是为了评估土壤中微生物将大气中的氮气转化为氨的能力，这一过程对维持土壤肥力和植物营养至关重要。固氮酶是一种能够催化氮气还原为氨的酶，主要存在于一些特定的细菌和古菌体内。测定土壤中固氮酶活性通常采用乙炔还原法(Acetylene Reduction Assay, ARA)，这是因为固氮酶除了能还原氮气外，还能催化乙炔还原为乙烯，而后者可以通过气相色谱等方法简便地检测。

　　乙炔还原法(ARA)的基本步骤：

　　样品准备：取适量的新鲜土壤样品，尽量避免破坏土壤结构，并保证样本具有代表性。

　　添加乙炔：将土壤样品置于密封容器中，在容器内注入少量乙炔气体(一般使容器内的乙炔浓度达到大约10%体积比)，因为固氮酶可以非特异性地将乙炔还原为乙烯。

　　孵育：在适宜温度下(通常是环境温度或根据研究对象调整至其z适生长温度)孵育数小时至过夜，以允许固氮微生物进行乙炔还原反应。

　　气体采样与分析：从密封容器中抽取一定量的气体样本，使用气相色谱仪(GC)分析其中乙烯的含量。由于乙炔到乙烯的转化率直接反映了固氮酶的活性，因此通过测量生成的乙烯量可以间接得知固氮酶的活性水平。

　　数据处理：根据测得的乙烯浓度以及相应的标准曲线，计算出单位时间、单位质量或体积土壤中产生的乙烯量，以此来表示固氮酶活性。

　　注意事项：

　　实验过程中需注意避免外界污染，特别是空气中的氧气可能抑制固氮酶活性，因此操作应在无氧条件下进行z佳。

　　固氮酶活性受多种因素影响，包括土壤湿度、温度、pH值及可利用碳源等，实验设计时应考虑这些因素。

　　此方法提供的是一个相对值，不同实验室间的结果比较需要标准化条件。

　　乙炔还原法因其简单易行而在生态学研究和农业实践中得到广泛应用，但它仅提供了关于固氮潜力的信息而非实际固定的氮量。对于更深入的研究，可能还需要结合其他技术手段进一步探讨固氮作用的具体机制及其贡献。