土壤过氧化氢酶(Soil Catalase, S-CAT)是土壤中重要的氧化还原酶，能催化过氧化氢(H₂O₂)分解为水和氧气，其活性可反映土壤微生物代谢强度及环境自净能力‌。下面是常用检测方法及步骤：

　　一、分光光度法(紫外法)

　　‌原理‌：S-CAT分解H₂O₂导致240nm处吸光度下降，通过吸光度变化率计算酶活性‌。

　　‌步骤‌：

　　‌样品处理‌：称取1g风干土样，加入pH7.0缓冲液(如磷酸盐缓冲液)和3% H₂O₂溶液，混匀后静置反应10分钟‌。

　　‌测定‌：离心取上清液，用紫外分光光度计在240nm处测定吸光度，记录下降值‌。

　　‌计算‌：以单位时间内吸光度变化量(ΔA/min)表示酶活性‌。

　　二、高锰酸钾滴定法

　　‌原理‌：通过滴定剩余H₂O₂消耗的KMnO₄体积，间接计算S-CAT活性‌。

　　‌步骤‌：

　　‌反应体系‌：5g土样+0.5mL甲苯(灭活微生物)+25mL 3% H₂O₂，4℃静置1小时‌。

　　‌终止反应‌：加入2mol/L H₂SO₄终止反应，过滤后取滤液滴定‌。

　　‌滴定‌：用0.02mol/L KMnO₄滴定至粉红色，记录消耗体积‌。

　　‌结果‌：以1小时内每克干土消耗KMnO₄的毫升数表示活性‌。

　　三、气体体积法

　　‌原理‌：直接测定S-CAT分解H₂O₂产生的氧气体积‌。

　　‌步骤‌：

　　‌反应装置‌：土样与H₂O₂在密闭反应瓶中反应，连接气体体积计‌。

　　‌测定‌：记录单位时间内氧气体积变化，计算酶活性‌。

　　四、电化学法

　　‌原理‌：通过电极检测反应中电流或电位变化‌。

　　‌特点‌：灵敏度高，适用于微量样品，但需专业设备‌。

　　注意事项

　　‌样品保存‌：新鲜土样需4℃短期保存，避免酶失活‌。

　　‌干扰控制‌：避免金属离子(如Fe²⁺)干扰，可加入EDTA螯合‌。

　　‌标准曲线‌：分光光度法需用H₂O₂标准液绘制曲线‌。

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