试剂

　　(1)甲亚胺-H:利用水浴加热或置于 30℃热水龙头下，将0.5g甲亚胺-H溶于约 10 mL 重蒸水中。

　　待溶解后，添加 1.0g/L 抗坏血酸并混合均匀直到溶解。z后用重蒸水定容至 100 mL。如果溶液浑浊,再加热直到完全溶解。每次使用的溶液需要当天配制以确保新鲜。

　　(2)乙二胺四乙酸(EDTA)溶液(0.025 mol/L):将 9.3gEDTA 溶解于重蒸水中，定容至1L，然后加入 1mL Brij-35 并混合均匀。

　　(3)缓冲溶液:将 250g醋酸铵溶解于 500 mL, 重蒸水中。缓慢添加约 100 mL 浓醋酸，不断搅拌,调 pH 值至 5.5 左右，然后加入 0.5 mL 的 Brii-35 并混合均匀。

　　(4)标准溶液:将 1000 mg硼(5.715gH3BO4)溶于 1L去离子水中配制成储备液 A，取 50 ml,储备液A用 0.4 moI/L HC1定容至1L配制成储备液 B。分别取 2.5~30 mL储备液 B，用去离子水稀释到1L，得到一系列 0.5~6 m/L 的硼标准溶液。

　　步骤

　　(1)取5mL 透明的过滤液置于试管中，加入2mL,缓冲溶液、2 mL EDTA 溶液和2 mL 甲亚胺-H溶液，每种溶液加入后要完全混合均匀。

　　(2)溶液静置1h，使用分光光度计测定 430 nm 处的吸光度。

　　(3)显色过程持续3~4h。

　　(4)显色的提取液pH 值应为 5.0 左右。

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