球囊霉素相关土壤蛋白(Glomalin-Related Soil Protein, GRSP)是由丛枝菌根真菌(Arbuscular Mycorrhizal Fungi, AMF)分泌的一种耐热、疏水性糖蛋白复合物，在土壤团聚体形成、碳固存和土壤结构稳定中起关键作用。其测定是评估土壤健康、菌根活性及生态恢复效果的重要指标。

　　实验步骤

　　1. 土壤样品准备

　　采集的土壤样品风干后，过 2 mm 筛，去除石块和植物根系等。

　　精确称取 1.0 克 过筛的土壤样品于 50 mL 离心管中。建议设置重复。

　　2. 球囊霉素的提取(这是关键步骤)

　　向装有土样的离心管中加入 8 mL 的 20 mM pH 8.0 柠檬酸钠缓冲液。

　　盖紧管盖，用涡旋振荡器剧烈振荡混匀5-10秒，确保土壤完全分散在提取液中。

　　将离心管放入高压灭菌锅中，在 121°C 下灭菌 30-60 分钟。这个步骤是利用高温和碱性缓冲液来选择性提取球囊霉素，同时破坏土壤微生物和酶活性，减少干扰。

　　注意：也有改良方法使用恒温水浴摇床在90°C水浴1小时，但121°C高压灭菌更为经典和彻底。

　　取出后，立即用冷水或冰浴冷却至室温。

　　将冷却后的样品在 10,000 g 的条件下离心 10 分钟，使土壤颗粒沉淀。

　　小心地将上清液转移至新的离心管或容量瓶中。这个上清液就是含有球囊霉素的粗提液。

　　3. Bradford 法测定蛋白含量

　　制作标准曲线：

　　用牛血清蛋白(BSA)配制一系列已知浓度的标准溶液(例如：0, 10, 20, 50, 100, 200, 500 μg/mL)。

　　取适量标准品溶液(如 100 μL)与 1-5 mL Bradford 工作液混合(具体比例取决于试剂说明和测定体积)。

　　室温静置 5-30 分钟(根据试剂要求)，让颜色充分发育。

　　在 595 nm 波长下测定各标准管的吸光度。

　　以BSA浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，并得到回归方程。

　　样品测定：

　　取与标准品相同体积的粗提液，与 Bradford 工作液以相同方式混合、显色和测定吸光度。

　　注意：如果样品吸光值超出标准曲线范围，需要用柠檬酸钠提取液进行适当稀释后重测。

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