土壤中对苯二酚(Hydroquinone，1,4-二羟基苯)的检测属于有机污染物分析范畴。对苯二酚是一种常见的工业化学品，广泛用于照相显影剂、抗氧化剂、染料中间体及化妆品中，具有毒性、生物累积性和潜在致癌性。其进入土壤后可能来源于工业废水灌溉、垃圾填埋渗滤液或农药降解产物。

　　1. 样品采集与保存

　　工具：使用不锈钢或特氟龙涂层采样器，避免污染。

　　容器：棕色玻璃瓶(避光)，并带有聚四氟乙烯内垫的瓶盖。

　　保存：样品采集后应立即冷藏(4°C)，并尽快分析。如需长期保存，应在-20°C下冷冻，并避免光照，因为对苯二酚易被空气氧化为醌。

　　2. 样品前处理

　　去除杂物：捡出石块、植物根系等。

　　风干与研磨：在避光、通风良好的条件下风干或冷冻干燥。研磨后过60目(0.25 mm) 筛，混匀。

　　含水率测定：另取一份样品测定含水率，z终结果需以干基质量计算。

　　3. 提取(将目标物从土壤基质中分离出来)

　　这是关键步骤，常用方法有：

　　加压流体萃取(PFE)/加速溶剂萃取(ASE)：目前的首选方法。在高温(80-120°C)和高压下，使用溶剂快速提取，效率高、溶剂用量少、自动化程度高。常用提取溶剂为丙酮-二氯甲烷混合液或甲醇。

　　超声波萃取：将土壤样品与提取溶剂混合，利用超声波的空化作用破碎细胞、增强传质。操作简单，但效率相对较低，可能需要多次提取。

　　索氏提取：经典方法，提取彻底，但耗时极长(通常18-24小时)，溶剂用量大。

　　4. 净化与浓缩(去除干扰物，提高检测灵敏度)

　　土壤提取液成分复杂，含有色素、脂肪等干扰物，必须净化。

　　净化：

　　固相萃取柱：常用。例如，使用硅胶柱、弗罗里硅土柱或C18反相柱。根据对苯二酚的极性，选择合适的洗脱溶剂。

　　液液萃取：有时也用于初步分离。

　　浓缩：净化后的溶液体积较大，浓度低，需要使用氮吹仪或旋转蒸发仪在温和温度下(如<40°C)浓缩至近干，再用甲醇或乙腈定容至小体积(如1.0 mL)，供HPLC分析。注意：全程需避光操作。

　　5. 仪器分析 - 高效液相色谱法

　　这是定性和定量的核心。

　　色谱柱：反相C18柱是常用的分析柱(例如，250 mm × 4.6 mm， 5 μm)。

　　流动相：由于对苯二酚是极性化合物，通常采用等度或梯度洗脱。

　　常用体系：甲醇/水或乙腈/水，并加入少量酸(如0.1%磷酸或1%乙酸)以抑制酚类化合物的电离，改善峰形。

　　典型比例：甲醇：水(含0.1%磷酸)= 20:80 或 30:70，具体需优化。

　　检测器：

　　紫外检测器(UV/VIS)：常用、经济的选择。对苯二酚在~290 nm处有较强紫外吸收，这是其z佳检测波长。

　　荧光检测器：灵敏度更高，选择性更好。但需要对苯二酚本身或其衍生物有荧光特性。有时可通过柱后衍生化实现。

　　电化学检测器：由于对苯二酚是电活性物质(易氧化还原)，此检测器具有极高的灵敏度和选择性，是分析痕量酚类的利器，但仪器较昂贵，维护要求高。

　　质谱检测器：若使用液相色谱-质谱联用，可提供z高的选择性和定性能力，尤其适用于复杂基质土壤样品的确认分析。

　　6. 定性与定量

　　定性：通过与对苯二酚标准品的保留时间比对进行定性。若使用HPLC-MS，可通过质谱图进一步确认。

　　定量：采用外标法或内标法。

　　外标法：配制一系列已知浓度的对苯二酚标准溶液，绘制标准曲线(浓度-峰面积)，根据样品的峰面积从曲线中计算浓度。

　　内标法(推荐)：在样品和标准品中加入一种性质类似但不干扰分析的内标物(如氘代对苯二酚或其他稳定酚类)，通过测定目标物与内标物的峰面积比值来定量，可有效减少前处理和仪器进样带来的误差。

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