酸性土壤微生物量碳(MBC, Microbial Biomass Carbon)和微生物量氮(MBN, Microbial Biomass Nitrogen)是衡量土壤微生物活性和养分转化潜力的关键指标。它们代表了土壤有机质中生物活性z强的部分，是土壤养分循环的“引擎”。在酸性土壤中，微生物活性常受低pH、铝毒性和养分限制的影响，因此准确测定MBC和MBN对于评估其肥力和生态功能尤为重要。

　　常用且被广泛接受的方法是氯仿熏蒸-浸提法(Fumigation-Extraction Method)。

　　一、 氯仿熏蒸-浸提法(核心原理)

　　该方法基于一个核心假设：氯仿熏蒸能杀死土壤中绝大部分微生物，使其细胞破裂，内容物(包括C和N)释放到土壤溶液中。通过比较熏蒸土壤和未熏蒸土壤的浸提液中可溶性碳、氮的差值，即可计算出微生物体内的碳和氮含量。

　　二、 标准操作流程

　　1. 样品准备

　　采集新鲜土壤，过2 mm筛，调节至适宜含水量(通常为田间持水量的50-60%)，在黑暗中预培养2-7天，以稳定微生物活性。

　　将土壤分为两份：熏蒸组 和 未熏蒸对照组。

　　2. 氯仿熏蒸(关键步骤)

　　将熏蒸组土壤放入真空干燥器中。

　　加入液态氯仿，同时用真空泵抽气，使氯仿汽化并充满干燥器。

　　在25°C黑暗条件下熏蒸24小时(对细菌和真菌有效杀灭)。

　　打开干燥器，用真空泵反复抽气，彻底去除残留氯仿(至少3-5次，每次30分钟)，避免干扰后续测定。

　　3. 浸提

　　浸提剂：通常使用 0.5 mol/L K₂SO₄ 溶液。

　　土水比：常用 1:4 或 1:5 (w/v)。

　　将熏蒸组和未熏蒸对照组土壤分别与K₂SO₄溶液混合，振荡30分钟，离心或过滤，得到澄清的浸提液。

　　4. 测定可溶性碳和氮

　　可溶性有机碳 (DOC)：使用总有机碳分析仪(TOC Analyzer) 测定浸提液中的有机碳含量。

　　可溶性氮 (DN)：可通过以下方法测定：

　　凯氏定氮法：测定浸提液中的总氮。

　　流动分析仪(FIA/SFA)：测定NH₄⁺-N和NO₃⁻-N，但此法会遗漏部分可溶性有机氮，因此推荐使用TOC仪配套的总氮模块(TNb)或高温氧化法测定总可溶性氮。

　　5. 计算微生物量碳(MBC)和微生物量氮(MBN)

　　MBC (mg/kg) = (EC × kₐ) / 烘干土质量

　　EC = 熏蒸土壤的DOC - 未熏蒸土壤的DOC (mg C/L)

　　kₐ = 转换系数(通常取0.45)。这是该方法的z大不确定性来源，表示被熏蒸杀死的微生物碳中能被K₂SO₄浸提出来的比例。0.45是基于大量研究的平均值，适用于多数土壤，但在酸性土壤中可能需要验证。

　　MBN (mg/kg) = (EN × kₙ) / 烘干土质量

　　EN = 熏蒸土壤的DN - 未熏蒸土壤的DN (mg N/L)

　　kₙ = 氮的转换系数(通常取0.54)。

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