土壤酶作为土壤中生物化学反应的催化剂，对土壤的生态功能和农业生产具有重要意义。为了准确评估土壤酶的活性水平，需要采用科学、规范的测定方法。

　　1. 脲酶活性

　　底物：10%尿素溶液

　　缓冲液：pH 6.8 磷酸盐缓冲液

　　培养：37℃, 24 h

　　显色：奈斯勒试剂 → 测 578 nm

　　产物：NH₄⁺(以NH₄-N计)

　　国标参考：LY/T 1237-1999(林业行业标准)

　　2. 蔗糖酶活性

　　底物：8%蔗糖溶液

　　缓冲液：pH 5.5 磷酸盐缓冲液

　　培养：37℃, 24 h

　　显色：3,5-二硝基水杨酸(DNS)→ 测 508 nm

　　产物：还原糖(以葡萄糖计)

　　3. 磷酸酶活性(以中性磷酸酶为例)

　　底物：对硝基苯磷酸钠(pNPP)

　　缓冲液：pH 6.5–7.0 Tris-HCl 或磷酸盐

　　培养：37℃, 1 h

　　终止+显色：NaOH → 黄色对硝基苯酚 → 测 400–410 nm

　　注意：酸性(pH 4–5)、碱性(pH 9–10)磷酸酶需分别测定

　　方法源自 Tabatabai & Bremner (1969)，广泛采用

　　4. 过氧化氢酶活性

　　底物：0.3–3% H₂O₂ 溶液

　　反应：土壤 + H₂O₂，室温振荡 20–60 min

　　终止：加入 KMnO₄ + H₂SO₄

　　滴定或比色：

　　滴定法：用 KMnO₄ 滴定剩余 H₂O₂(传统)

　　比色法：H₂O₂ 与钛盐生成黄色络合物 → 测 410 nm

　　注意：H₂O₂ 自然分解快，需设严格空白

　　5. 脱氢酶活性

　　电子受体：2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)

　　反应：土壤 + TTC + 葡萄糖，37℃, 24 h

　　产物：红色三苯基甲臜(TF)

　　提取：甲醇或丙酮

　　测 OD₄₈₅

　   脱氢酶仅存在于活细胞，是活微生物活性的直接指标

       来源：网络