土壤中有机酸(Organic Acids)是一类由植物根系分泌、微生物代谢或有机质分解产生的低分子量羧酸(如草酸、柠檬酸、苹果酸、乙酸等)，在养分活化(尤其磷、铁、铝)、重金属迁移与钝化、根际微生态调控及酸性土壤形成中起关键作用。

　　尽管有机酸对土壤过程至关重要，但因其浓度低(μg/g级)、易降解、种类多，检测技术难度高，尚未纳入常规土壤检测项目，主要应用于科研、污染修复机理研究或精准农业前沿领域。

　　步骤1：快速采样与保存(关键!)

　　采样工具：无菌不锈钢铲或根际土壤取样器;

　　立即冷冻：样品装入预冷离心管，液氮速冻 → -80°C保存;

　　禁止风干或常温运输(有机酸24h内损失>50%)。

　　步骤2：提取方法

　　推荐：去离子水或CaCl₂溶液振荡提取

　　称取5.0 g新鲜土壤(或冻干土);

　　加20 mL 超纯水 或 0.01 mol/L CaCl₂(模拟土壤溶液离子强度);

　　4°C避光振荡30 min(200 rpm);

　　12,000 rpm离心15 min;

　　上清液过 0.22 μm 水系滤膜;

　　-20°C避光保存，48 h内分析。

　　禁用有机溶剂(如甲醇)提取——会同时溶出腐殖酸，干扰后续分析。

　　步骤3：分离与定量方法

　　方法1：高效液相色谱-紫外检测(HPLC-UV)

　　色谱柱：

　　Aminex HPX-87H(Bio-Rad)

　　或 C18反相柱 + 离子抑制(磷酸盐缓冲液)

　　流动相：

　　0.005–0.01 mol/L H₂SO₄(等度洗脱)

　　流速：0.6 mL/min

　　检测波长：210 nm(羧基吸收)

　　保留时间参考(HPX-87H柱)：

　　甲酸：～8 min

　　乙酸：～10 min

　　草酸：～12 min

　　柠檬酸：～18 min

　　优点：成本较低，多数高校/研究所具备;

　　缺点：腐殖酸在210 nm有强吸收，需良好分离。

　　方法2：离子色谱法(IC)

　　色谱柱：IonPac ICE-AS1(Dionex)

　　检测器：电导检测器(抑制型)

　　优势：专属性强，不受腐殖酸干扰;

　　局限：设备昂贵，普及率低。

　　方法3：气相色谱-质谱(GC-MS)——需衍生化

　　衍生化试剂：BSTFA + TMCS(硅烷化)

　　适用：挥发性有机酸(甲酸、乙酸);

　　不推荐：柠檬酸、草酸等难挥发酸衍生复杂。

　　方法4：酶法/比色法(仅限单一酸)

　　如草酸氧化酶法测草酸;

　　适用于大批量筛查，但特异性差。

　　综合推荐：HPLC-UV(Aminex HPX-87H柱) 是性价比z高方案。

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