土壤微生物生物量碳(MBC, Microbial Biomass Carbon)的测定是土壤微生物生态学研究中的核心项目之一，它代表了土壤中活体微生物(不包括植物根系)的总碳量，是土壤活性养分的“库”和“源”，也是评价土壤肥力和健康的关键指标。

　　1. 样品准备

　　取 新鲜土壤(过 2 mm 筛)，4°C 保存 ≤24 h;

　　调节含水率至 田间持水量的 50%(约 20–30%，避免过干或过湿);

　　称两份平行样：

　　熏蒸样(F)：25.0 g(湿重)

　　未熏蒸样(UF)：25.0 g(湿重)

　　2. 氯仿熏蒸

　　将土壤平铺于培养皿中，放入真空干燥器;

　　干燥器底部放一小烧杯，加入 50 mL 无乙醇氯仿;

　　抽真空 3–5 min(促进 CHCl₃ 挥发);

　　黑暗条件下熏蒸 24–48 小时(推荐 24 h);

　　熏蒸结束后，通风橱中敞口放置 24 h 以彻底去除残留氯仿(否则抑制后续提取)。

　　3. K₂SO₄ 提取

　　向熏蒸样和未熏蒸样中各加入 100 mL 0.5 M K₂SO₄;

　　25°C 振荡 30 min(180 rpm);

　　离心(4000 rpm, 10 min)或抽滤(0.45 μm 滤膜);

　　收集上清液，4°C 保存 ≤48 h(尽快测 TOC)。

　　4. 有机碳测定

　　推荐方法：

　　TOC 分析仪(直接测 DOC，准确高效);

　　若无 TOC 仪，可用 重铬酸钾氧化-外加热法(参照土壤有机碳测定 GB 9834)：

　　取 5 mL 提取液 + 5 mL 0.8 M K₂Cr₂O₇ + 7.5 mL 浓 H₂SO₄;

　　沸水浴 5 min;

　　冷却后滴定或比色(580 nm)。

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