土壤碱性蛋白酶(Soil Alkaline Protease, S-ACPT)是土壤微生物分泌的一类在碱性条件(pH 8–11)下催化蛋白质水解为多肽或氨基酸的胞外酶，广泛参与土壤氮素循环、有机质降解及污染物(如蛋白质类废弃物)的生物转化。其活性可反映土壤微生物代谢活力、氮素矿化潜力及生态健康状况。

　　推荐操作流程(以酪蛋白法为例)

　　试剂配制

　　提取缓冲液：

　　0.1 M 磷酸盐缓冲液(pH 7.0) + 0.1% Tween 80(助溶)

　　注：部分方法直接用 pH 10.0 甘氨酸-NaOH 缓冲液进行反应

　　反应缓冲液：

　　0.1 M 甘氨酸-NaOH 缓冲液(pH 10.0)

　　底物溶液：

　　1%(w/v)酪蛋白溶于反应缓冲液，40°C 预热

　　终止液：

　　5% 三氯乙酸(TCA)

　　显色剂：

　　福林酚试剂(Folin-Ciocalteu)，使用前稀释 1:3

　　操作步骤

　　土壤悬液制备：

　　称取 1.0 g 新鲜土壤(过 2 mm 筛)→ 加 4 mL 提取缓冲液 → 振荡 30 min(150 rpm)→ 10,000 rpm 离心 10 min → 取上清液(粗酶液)。

　　酶反应体系(总体积 1.5 mL)：

　　粗酶液：0.5 mL

　　酪蛋白底物(1%，pH 10.0)：0.5 mL

　　反应缓冲液(pH 10.0)：0.5 mL

　　对照组：先加 TCA 终止，再加底物(灭活酶)

　　反应条件：

　　40°C 水浴，精确反应 60 分钟

　　终止与显色：

　　加 1.5 mL 5% TCA → 静置 10 min → 3000 rpm 离心 5 min

　　取 1.0 mL 上清液 + 1.0 mL 0.5 M Na₂CO₃ + 0.2 mL 福林酚试剂

　　室温避光反应 30 min

　　测定：

　　680 nm 测吸光度(A)

　　以酪氨酸标准曲线(0–50 μg/mL)换算产物量

　　酶活性计算

　　A ：吸光度

　　V总V总​ ：反应体系总体积(mL)

　　D ：稀释倍数

　　m ：土壤质量(g)

　　t ：反应时间(h)

　　k ：酪氨酸标准曲线斜率(μg/OD)

　　单位也可表示为 nmol tyrosine·g⁻¹·h⁻¹(若用摩尔浓度)。

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