土壤酶是土壤中重要的生物活性物质，参与有机质的分解和养分循环。常见的土壤酶包括脲酶、磷酸酶、蔗糖酶、过氧化氢酶等。以下是几种常见土壤酶活性的检测方法：

　　1. 脲酶活性测定

　　原理：脲酶催化尿素水解生成氨和二氧化碳，通过测定氨的生成量来反映脲酶活性。

　　试剂与材料：

　　尿素溶液(10%)

　　柠檬酸缓冲液(pH 6.7)

　　苯酚-次氯酸钠试剂

　　分光光度计

　　操作步骤：

　　样品处理：取1g土壤，加入2mL尿素溶液和1mL柠檬酸缓冲液，37℃培养24小时。

　　显色反应：加入5mL苯酚-次氯酸钠试剂，静置20分钟。

　　测定吸光度：在625nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算氨的生成量。

　　计算：

　　脲酶活性(mg NH₄⁺-N/g·h)= (C × V) / (T × W)

　　C：氨浓度(mg/mL)

　　V：反应体积(mL)

　　T：反应时间(h)

　　W：土壤重量(g)

　　2. 磷酸酶活性测定

　　原理：磷酸酶催化有机磷化合物水解生成无机磷，通过测定无机磷的生成量来反映磷酸酶活性。

　　试剂与材料：

　　对硝基苯磷酸二钠(PNPP，底物)

　　Tris-HCl缓冲液(pH 6.5)

　　氢氧化钠(NaOH)

　　分光光度计

　　操作步骤：

　　样品处理：取1g土壤，加入1mL PNPP溶液和2mL Tris-HCl缓冲液，37℃培养1小时。

　　终止反应：加入1mL NaOH溶液(0.5mol/L)。

　　测定吸光度：在405nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算无机磷的生成量。

　　计算：

　　磷酸酶活性(μmol PNP/g·h)= (C × V) / (T × W)

　　C：对硝基苯酚(PNP)浓度(μmol/mL)

　　V：反应体积(mL)

　　T：反应时间(h)

　　W：土壤重量(g)

　　3. 蔗糖酶活性测定

　　原理：蔗糖酶催化蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，通过测定还原糖的生成量来反映蔗糖酶活性。

　　试剂与材料：

　　蔗糖溶液(8%)

　　磷酸缓冲液(pH 5.5)

　　3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂

　　分光光度计

　　操作步骤：

　　样品处理：取1g土壤，加入1mL蔗糖溶液和2mL磷酸缓冲液，37℃培养24小时。

　　显色反应：加入1mL DNS试剂，沸水浴5分钟，冷却后稀释。

　　测定吸光度：在540nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算还原糖的生成量。

　　计算：

　　蔗糖酶活性(mg葡萄糖/g·h)= (C × V) / (T × W)

　　C：葡萄糖浓度(mg/mL)

　　V：反应体积(mL)

　　T：反应时间(h)

　　W：土壤重量(g)

　　4. 过氧化氢酶活性测定

　　原理：过氧化氢酶催化过氧化氢分解生成水和氧气，通过测定过氧化氢的消耗量来反映过氧化氢酶活性。

　　试剂与材料：

　　过氧化氢溶液(0.3%)

　　磷酸缓冲液(pH 7.0)

　　硫酸(H₂SO₄)

　　高锰酸钾溶液(0.02mol/L)

　　滴定管

　　操作步骤：

　　样品处理：取1g土壤，加入5mL过氧化氢溶液和5mL磷酸缓冲液，室温反应30分钟。

　　终止反应：加入5mL硫酸溶液(1mol/L)。

　　滴定：用高锰酸钾溶液滴定剩余的过氧化氢，记录消耗量。

　　计算：

　　过氧化氢酶活性(mL 0.02mol/L KMnO₄/g·h)= (V₀ - V) / (T × W)

　　V₀：空白滴定消耗的高锰酸钾体积(mL)

　　V：样品滴定消耗的高锰酸钾体积(mL)

　　T：反应时间(h)

　　W：土壤重量(g)

　　5. 纤维素酶活性测定

　　原理：纤维素酶催化纤维素水解生成还原糖，通过测定还原糖的生成量来反映纤维素酶活性。

　　试剂与材料：

　　羧甲基纤维素钠(CMC，底物)

　　醋酸缓冲液(pH 5.0)

　　DNS试剂

　　分光光度计

　　操作步骤：

　　样品处理：取1g土壤，加入1mL CMC溶液和2mL醋酸缓冲液，50℃培养24小时。

　　显色反应：加入1mL DNS试剂，沸水浴5分钟，冷却后稀释。

　　测定吸光度：在540nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算还原糖的生成量。

　　计算：

　　纤维素酶活性(mg葡萄糖/g·h)= (C × V) / (T × W)

　　C：葡萄糖浓度(mg/mL)

　　V：反应体积(mL)

　　T：反应时间(h)

　　W：土壤重量(g)